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NTX,小鼠Ⅰ型膠原N末端肽elisa試劑盒技術指導
本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中小鼠Ⅰ型膠原N末端肽（NTX）的含量。有效期：6個月
保存條件：2-8℃
本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠Ⅰ型膠原N末端肽（NTX）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠Ⅰ型膠原N末端肽（NTX）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
NTX,小鼠Ⅰ型膠原N末端肽elisa試劑盒技術指導的四大特性
1．特異性強：不與其它細胞因子反應。
2．重復性好：板內、板間變異系數均小于10%。
3．穩定性高：實驗效果很穩定。
4．超靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品，稀釋度和樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
具體操作方法
以雙抗體夾心法為例展示：
1、雙抗體夾心法檢測抗原
操作步驟如下：
1）將特異性抗體與固相載體結合，形成固相抗體。洗滌除去尚未結
合的抗體及一些雜質。
2）加入待測標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。
3）加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4）加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色，測知標本中抗原的量。在臨床檢驗中，此法適用于檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如 HBeAg、HBsAg、hCG 、AFP等。只要獲得針對受檢抗原的特異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標所使用的抗體最好分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步檢測。
在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成"夾心復合物"。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象，此時反應后顯色的吸光值（位于抗原過剩帶上）與標準曲線（位于抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測讀，所得結果將低于實際的含量，這種現象被為鉤狀效應（hook effect），因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等）時，應注意可測范圍的最高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
客戶收集樣品要求
·客戶需提供待檢測抗體和包被用抗原。
·檢測的樣本為細胞培養上清、人和動物的血清、血漿。
·樣本收集后應立即-20℃保存，若長期保存應-70℃。
·樣本量的要求：若一個指標做復孔檢測應不少于250ul，做單孔檢測應不少于120ul。建議若客戶樣本量充足最好提供500ul以上。
·客戶的樣本收集后，立即按要求保存，切忌反復凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運輸。郵寄前請與技術支持溝通確認。
elisa試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（480ng/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
Elisa試劑盒標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
240ng/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
120ng/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
60ng/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
30ng/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
15ng/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。
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