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詳細(xì)內(nèi)容
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
| 產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
| 禽輪狀病毒A組RT-PCR試劑盒品牌 | GOY-01P63582 | 50次 |
儲存條件：
產(chǎn)品僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。
3：熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)時熒光定量PCR：
實(shí)時熒光定量PCR：
實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性好，即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實(shí)時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時熒光定量PCR是迄為止定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好的定量方法，已得到全的公認(rèn)，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴(kuò)增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。
芹菜苷; 芹黃苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： N-Methyl-N-TMS-acetamide調(diào)節(jié)蛋白GAL4抗體包裝25g
芹菜素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： N-Trimethylsilylimidazole配子生成素結(jié)合蛋白1抗體包裝50mg
芹菜素-6-C-α-L-吡喃阿拉伯糖-8-C-β-D-...英文名稱： N-Trimethylsilylacetamide鋅指蛋白403/喉癌相關(guān)蛋白1抗體包裝1g
芹菜素-7-O-(2G-鼠李糖)龍膽糖苷英文名稱： 1,1,3,3-Tetramethyldisilazane鳥苷酸環(huán)化酶α2/GCS-α-2抗體包裝5g
芹菜素-7-O-葡糖酸苷英文名稱： 1-(tert-Butyldimethylsilyl)imidazoleG蛋白偶聯(lián)受體7抗體包裝1g
秦皮（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： N,O-Bis(tert-butyldimethylsilyl)acetamide 糖基磷脂酰肌錨連接蛋白1抗體包裝250mg
秦皮苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 1-(Dimethylisopropylsilyl)imidazole3-磷酸甘油酰基轉(zhuǎn)移酶2抗體包裝5g
秦皮素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 1,3-Bis(chloromethyl)tetramethyldisilazaneG蛋白修補(bǔ)結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體包裝100g
秦皮素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Tetramethyl-1,3-diphenyldisilazane富含GC啟動子結(jié)合蛋白1/血管壁相連蛋白抗體包裝25g
秦皮乙素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： N-Methyl-N-nitrosourethane血管壁相連蛋白樣蛋白1抗體包裝5g
青黛（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： N-AcetylimidazoleG蛋白偶聯(lián)受體151抗體包裝100g
青風(fēng)藤（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 1-(Heptafluorobutyryl)imidazole G蛋白偶聯(lián)受體77抗體包裝25g
青果（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Pentafluorobenzyl Bromide精神發(fā)育遲滯相關(guān)蛋白Rab GDI α抗體包裝5g
青蒿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： O-(2,3,4,5,6-Pentafluorobenzyl)hydroxylamine Hydrochloride甘油磷酸二酯酶磷酸結(jié)構(gòu)域4抗體包裝100g
青蒿琥酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： NonaneD-果糖6磷酸轉(zhuǎn)移酶2抗體包裝25g
蘇云金芽胞桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP凝血酶原體蛋白試劑盒木犀草素;Luteolin
巴氏醋桿菌Acetobacter│pasteurianus 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品凝血酶原片段F1+2試劑盒麥冬皂苷D;Ophiopogonin D
Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格：>98%凝血酶血栓調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物試劑盒2”-O-沒食子酰基金絲桃苷;2”-O-
禽輪狀病毒A組RT-PCR試劑盒品牌無水溴化鋅
禽輪狀病毒A組RT-PCR試劑盒品牌無水溴化鋅
Zinc bromide
產(chǎn)品規(guī)格： CP，98%
包裝：100克/500克
CAS號：7699-45-8
別：CP
含量：≥98.0%
溴氧化物：合格
鐵：≤0.0005%
澄清度試驗(yàn)：合格
硫酸鹽：≤0.01%
性狀：無色斜方晶系結(jié)晶粉末。 有強(qiáng)烈的金屬味。易吸濕。1g溶于0.25ml水、0.5ml 90％乙醇，溶于丙酮和氫氧化堿溶液。溶液對石蕊呈酸性，pH 約為4。在濃溶液中能產(chǎn)生Zn(ZnBr4)復(fù)鹽。相對密度 (d254)4.201。熔點(diǎn)394℃。沸點(diǎn) 697℃(部分分解)。折光率 (n18D)1.5452。有刺激性。
用途：生化研究。核反應(yīng)視窗保護(hù)屏。制備溴化銀膠體乳劑用于照相
保存：RT，避光
關(guān)鍵詞：禽輪狀病毒A組 RT-PCR試劑盒
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